猪活体鼻拭子和唾液采集技术主要依靠浸润吸收的方式分别采集猪只自然分泌的鼻腔黏液和口腔唾液，适用于各日龄猪群，可进行群体采样和猪只个体采样，操作简便，成本低廉，对猪只无损伤，成功率高，更加符合动物福利原则。采集的样本可用于病原的监测，病原检出率高，能反映猪群的疫病管理的实际情况，适合大面积推广。

一、准备

1.鼻拭子采集准备的材料

医用棉签（根据猪群日龄的不同选择大小均一的棉签）、75%的酒精棉球、15 mL离心管（或干净自封袋）、pH 7.4的PBS等；还需要一些辅助器材如：猪用保定器或保定绳、保温箱、冰块、记号笔、登记表、标签等。

2.唾液样品采样前需要准备的材料

口腔专用拭子、棉签（大头）或棉质绳子（未漂白、未染色）、75%的酒精棉球、5 mL离心管（或自封袋）、pH 7.4的PBS等；还需要一些辅助器材如：猪用保定器或保定绳、记号笔、标签、登记表、保温箱、冰块等；

二、样品采集

1.猪鼻拭子采样技术操作

1.1猪只保定

20 kg以下的仔猪及保育猪采用单人倒提保定法或者双人仰卧保定法，20 kg以上的猪只用猪只保定器保定，抓猪、保定猪时，动作不要粗暴，要尽量用抚摸动作，使其安静。

1.2样品采集

采集人员蹲于猪的左侧，左手抓紧实验猪的上下颚，使猪嘴紧闭，右臂肘部与右腿将实验猪颈部夹住，对其进行固定。当实验猪情绪稳定后，右手持棉签，将棉签与猪鼻中隔成45°角轻轻插入，遇到鼻中隔后，稍作拐弯，绕过骨状瓣膜，与鼻中隔平行方向插入约2 cm。轻轻转动棉签，刺激实验猪的喷嚏反射，当打2~3个喷嚏后，轻轻拔出棉签，放入1 mL样品贮存液中，折断多余部分的棉棒，密闭收集管，标号后于4℃保存。

1.3注意事项

①尽量选择棉签棒稍长、头稍厚的医用无菌棉签，仔猪尽量选择无菌超细棉签。

②采样时，操作尽量轻缓，避免对猪只的鼻腔黏膜造成损伤。

③如果鼻拭子采集失败如鼻拭子掉落、鼻拭子上有明显血迹等，则需要重新采集。重新采集则需从另一个鼻孔进行操作。

2 猪活体唾液采样技术操作

2.1逐头采样法

2.1.1猪只保定

20 kg以下的仔猪及保育猪采用单人倒提保定法或者双人仰卧保定法，20 kg以上的猪只用猪只保定器保定，抓猪、保定猪时，动作不要粗暴，要尽量用抚摸动作，使其安静。

2.1.2样品采集

猪只采用专用保定器保定，当猪只情绪稳定后，使猪嘴张开，采集人员站于猪的左前方，将棉签轻轻放入猪的嘴边，缓慢转动棉签，刺激试实验猪只咀嚼，咀嚼30 s~60 s后，将棉签放入1 mL样品贮存液中，折断多余部分的棉棒，密闭收集管，标号后于4℃保存。

2.1.3注意事项

①尽量选择棉签棒稍长、头稍厚的医用无菌棉签。

②采样时，操作尽量轻缓，避免对猪只的口腔粘膜造成损伤。

③采集过程中，尽量用棉签缓慢刺激实验猪只咀嚼，咀嚼时间控制在30 s以上。

2.2群体采样法

2.2.1样品采集

将猪群禁食禁水6 h后（或在早上饲喂前）将棉质绳子系在固定支架上或围栏上，吸引猪只玩耍和咀嚼。绳子两端高度位于猪只肩胛骨高度，远离水或饲料。悬挂时间20 min左右，待绳子经过栏舍内所有猪只的咀嚼后，把绳子放到封口袋内，立即冷藏运输到实验室开展检测（条件允许，可以将收集的液体放在-20℃或更低温度冻存，冻存对抗体检测影响较小）。

2.2.2注意事项

①绳子尽量远离水和饲料。

②不建议对口液进行过滤除菌、添加抗生素等前处理。

③不建议将唾液样品长时间暴露于室温环境，尤其是环境较温暖的产房和保育舍。

④该方法较适用于健康猪群的病原监测。

⑤单独饲养的母猪需要在早上喂食前取样，将引诱剂如糖水或果汁喷在绳子上（不要浸润），可以提高成功率。断奶仔猪（18～20d的猪）应提前对棉绳进行适应性训练。

⑥选定的样品应具有代表性，合理分布在棚舍的不同区域，一般每栋小型猪舍用5根绳子，大型猪舍用10根绳子。

三、样品处理

1鼻拭子样品的处理

将收集的鼻拭子用无菌PBS浸润后，在涡旋振荡器上震荡30 s后，用1mL移液器尽量吸出鼻拭子浸液至2 mL离心管内，冷藏运输至实验室开展检测。

2唾液样本的处理

通过在袋子里挤压绳子（或者用均质拍打器处理），让液体在袋子底部聚集，随后将封口袋一角剪破，将液体收集到5 mL离心管内，冷藏运输至实验室开展检测。

四、注意事项

1. 采集人员要做好生物安全防护;

2. 每份样品采集完毕需更换一次性手套、猪保定器具等;

3. 废弃物集中收集并无害化处理，避免交叉污染和病原扩散。